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臺式低速冷凍離心機(jī)提取細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白離心詳細(xì)步驟
時(shí)間：2021-09-08
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來源：四川蜀科儀器有限公司
臺式低速冷凍離心機(jī)，轉(zhuǎn)速一般不超過4000r/min，最大容量為2~4L，是實(shí)驗(yàn)室于大量初級分離提取生物大分子、沉淀物等。其轉(zhuǎn)頭多用鋁合金制的甩平式和角式兩種，離心管有硬質(zhì)玻璃、聚乙烯硬塑料和不銹鋼管多種型號。離心機(jī)裝配有驅(qū)動電機(jī)、定時(shí)器、調(diào)整器（速度指示）和制冷系統(tǒng)（溫度可調(diào)范圍為-20~+40℃），可根據(jù)離心物質(zhì)所需，更換不同容量和不同型號轉(zhuǎn)速的轉(zhuǎn)頭。
1.決定細(xì)胞生長狀態(tài)，細(xì)胞生長狀態(tài)應(yīng)該是80%或者更好：
2.用離心機(jī)以1500r/min離心5min
3.棄上清液，用等體積的冷PBS洗細(xì)胞，像步驟2那樣，反復(fù)3次
4.根據(jù)估計(jì)的沉淀量加入5倍體積的isotoniclysisbuffer到細(xì)胞顆粒中，使細(xì)胞溫和懸浮，盡量避免泡沫
5.加入裂解液lysisbuffer在懸浮的細(xì)胞中，并放在冰上15min讓細(xì)胞膨脹，可以通過顯微鏡檢查
6.對于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中膨脹的細(xì)胞，加入10%的IGEPALCA-630使最后的濃度達(dá)到0.3%，混勻，加的時(shí)候要溫和
7.立即離心（量大的可以用1.5ml的EP管，以5500r/min離心30s；量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min）
8.轉(zhuǎn)移上清液（細(xì)胞質(zhì)蛋白）到一個(gè)新的冷凍管中
9.用懸浮顆粒5倍體積的isotoniclysisbuffer懸浮細(xì)胞，并混勻
10.用離心機(jī)離心細(xì)胞懸浮液，以1500r/min離心5min，移掉上清液
11.用2/3倍體積的extractionbuffer懸浮顆粒
12.把管子放置在震蕩混勻器上，以700r/min，15min震蕩混勻，接著以1400r/min,15min,整個(gè)過程要仔細(xì)，避免泡沫產(chǎn)生
13.以9400r/min離心15min，低溫離心完后轉(zhuǎn)移上清液到一個(gè)新的冷凍離心管中
14.分成幾份用液氮冷凍，并且保存起來（長期保存應(yīng)放在-80℃上，短期保存要放在-20℃上）
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